Análisis Cromatográfico

Separación de Aminoácidos por Cromatografía en Capa Fina

El orden de las manchas de aminoácidos de arriba (1) a abajo (4) en una placa cromatográfica recubierta con ninhidrina y calentada es:

1. Fenilalanina
2. Tirosina
3. Alanina
4. Serina

Desarrollo de un Método GC

Tres variables experimentales bajo el control del analista en un método GC son:

• Temperatura del horno
• Velocidad de flujo de gas portador
• Programa de temperatura

Comportamiento del Analito a Baja Temperatura en GC

A temperaturas demasiado bajas, el analito podría no volatilizarse adecuadamente, lo que afectaría la eficiencia y sensibilidad del análisis por cromatografía.

Ventajas de una Temperatura Baja en GC

Una temperatura baja puede mejorar la calidad y precisión de un análisis por GC al permitir una mejor separación de compuestos con puntos de ebullición cercanos.

Separación de Cafeína, Catequina y Fenol

Se propone utilizar cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) con una columna C18 y un gradiente de temperatura de 25 °C a 40 °C para la separación de cafeína, catequina y fenol. La columna C18 ofrece una buena separación para compuestos polares y el gradiente de temperatura optimiza la elución de los analitos.

Ventajas y Desventajas de H₂ vs. N₂ como Gas Portador

Ventajas de H₂: Mayor sensibilidad, menor tiempo de análisis y mayor eficiencia en la separación de componentes.

Desventajas de H₂: Mayor inflamabilidad, costo y dificultad en la detección de compuestos inorgánicos en comparación con N₂.

Uso de CO₂ como Gas Portador en FID

El CO₂ no se puede usar como gas portador en un detector de ionización de llama (FID) porque no es inflamable y no soporta la combustión necesaria.

Detectores para Análisis de Herbicidas

Para el análisis de trazas de herbicidas:

• 2,4-D: Detector de ionización de llama (FID)
• Atrazina: Detector de captura de electrones (ECD)
• RoundUp (Glifosato): Detector de espectrometría de masas (MS)

Detector para Análisis de Diuréticos Tiazidicos

Para el análisis de diuréticos tiazidicos en muestras de orina, se utilizaría un detector de captura de electrones (ECD) debido a su alta sensibilidad para compuestos halogenados.

Mejora de la Resolución en Cromatografía

La mejor opción para mejorar la resolución de dos picos coeluyentes a bajo volumen de retención es utilizar una columna más larga. Esto aumenta la superficie de interacción y el tiempo de separación, permitiendo una mejor resolución. Las otras opciones no son ideales:

• Velocidad de gas portador más rápida o lenta: No garantiza una mejor resolución y puede afectar negativamente la separación.
• Temperatura de columna más alta: Puede afectar la selectividad, pero no necesariamente mejora la resolución.
• Temperatura de columna más baja: Afecta la eficiencia y no garantiza una mejor resolución.

Cromatografía Líquida de Alto Rendimiento (HPLC)

La HPLC separa, identifica y cuantifica componentes en una mezcla mediante una fase móvil líquida que pasa a través de una columna con fase estacionaria. Su alta precisión y capacidad para mezclas complejas la hacen útil en farmacéutica, control ambiental y seguridad alimentaria.

Aplicaciones de la Resonancia Magnética Nuclear (NMR) en Metabolómica

• Análisis de Metabolómica: Análisis de mezclas complejas como muestras biológicas.
• Identificación y Elucidación de Estructuras: Determinación de la estructura de metabolitos.
• Cuantificación de Metabolitos (qNMR): Cuantificación de concentraciones relativas y absolutas.
• Uso de Isótopos Estables: Determinación del destino metabólico de drogas o nutrientes.
• Interacciones Metabolito-Proteína: Estudio de interacciones para entender la regulación metabólica.

Reglas de Fragmentación en Espectrometría de Masas

• Regla 1: Ruptura de enlaces C-C en ramificaciones. Carga positiva en el carbocatión más estable.
• Regla 2: Escisión de enlaces arílicos y bencílicos en dobles enlaces o sistemas aromáticos.
• Regla 3: Fragmentación de enlaces en carbonos con heteroátomos.
• Regla 4: Transposición de McLafferty en dobles enlaces y heteroátomos.

Análisis Metabolómico de Rábanos Expuestos a Pb y Cd

• Uso de PCA y PLS-DA para visualizar datos.
• Exposición de raíces a Pb o Cd y análisis con GC-MS.
• Integración de datos metabolómicos y transcriptómicos.

Resultados Principales

• Identificación y cuantificación de metabolitos sensibles a Pb y Cd.
• Cambios en vías metabólicas por Pb.
• Variaciones en la producción de energía por Cd.

Conclusiones

• Comprensión de la respuesta al estrés por metales pesados en rábanos.
• Información para la gestión de la contaminación por metales pesados en cultivos.

Etiquetas: cromatografía, Espectrometria de masas, GC-MS, HPLC, metabolómica