Análisis Coproparasitológico

Indicaciones para la Toma de Muestras

1. En los dos últimos días previos al comienzo de la toma de muestra, evitar tomar purgantes oleosos, antiparasitarios o compuestos que contengan carbón o bario (como antidiarreicos o líquidos de contraste para radiología, por ejemplo).
2. En pacientes adultos: defecar en un recipiente limpio y seco. No son aceptables las muestras tomadas de inodoros y retretes.
   • En pacientes pediátricos: tomar muestra del pañal.
3. NO tomar muestras mezcladas con orina.
4. Cada muestra debe ser equivalente a dos cucharaditas de las suministradas con los frascos.
5. Heces formes o pastosas: tomar 3 muestras (una sola por día) en días no consecutivos, cubriendo un período no menor de 7 días y no mayor de 10 días. (Tomar por ejemplo una muestra cada dos días).
   • Heces acuosas: tomar 3 muestras (una sola por día) en días consecutivos.
6. Colocar las muestras, a medida que se van recolectando, en el frasco provisto por el laboratorio, mezclando bien cada vez.
7. Si en las deposiciones se observan gusanos, colocarlos en otro recipiente limpio que contenga agua corriente, y llevarlo al laboratorio junto con las muestras tomadas.

Diagnóstico Parasitológico

El diagnóstico consiste en la detección de huevos, larvas o adultos de helmintos, así como la observación de trofozoitos (forma vegetativa) o quistes de protozoos.

Identificación

La identificación se lleva a cabo en función de la morfología y a través de pruebas complementarias como el hemograma (anemia, leucocitosis, eosinofilia) y la radiología (detección de hidatidosis).

Detección Directa en Heces

En el caso de la investigación de Trofozoitos deberá hacerse un procesamiento rápido que no deberá superar los 30 minutos después de la recolección de la muestra.

En caso de huevos y larvas no es tan importante el rápido procesamiento. Se utilizará un conservante que se añadirá en proporción 3:1, es decir 3 partes de conservante por 1 de muestra.

Los conservantes más comúnmente utilizados son: formalina (formol al 5-10%); PVA (Alcohol Polivinílico) y MIF (Mertiolate Iodo y Fenol)

Generalmente se necesitan 3 muestras recogidas con intervalos de entre 2-3 días, con el fin de que en alguna de ellas aparezcan los elementos parasitarios en estudio.

A la muestra se le realiza un EXAMEN MACROSCÓPICO en el cual observaremos a los parásitos enteros y la consistencia de la muestra (formes o semiformes; blandas; o líquidas).

También se le realiza un EXAMEN MICROSCÓPICO en el cual se buscan trofozoitos, quistes y huevos.

El procesamiento de la muestra consiste en los siguientes pasos:

• Realizar la suspensión de las heces
• Depositar una gota en un porta
• Añadir un colorante, generalmente lugol, que tiñe las estructuras de un color amarillo-marrón.
• Colocar un cubre
• Observar al microscopio con el objetivo de bajo aumento
• Se pueden llevar a cabo TÉCNICAS DE CONCENTRACIÓN en el caso de que el microorganismo sea escaso en la muestra.
  • Existen dos tipos de técnicas de concentración:
  • 1. Concentración por Flotación: Se aplican por lo general en muestras fecales frescas y se utilizan rutinariamente para el diagnóstico de huevos y quistes de parásitos y comensales intestinales (Huevos, larvas y quistes).
    • Estas técnicas utilizan soluciones de una densidad superior a los elementos parasitarios (habitualmente mayor que 1,18), lo que permite que éstos floten en la superficie.
  • 2. Concentración por Sedimentación:
    • En estas técnicas los elementos parasitarios se encuentran en el sedimento de la muestra centrifugada o decantada.
    • Observar el sedimento utilizando soluciones yodadas (lugol) que proporciona un color amarillo-marrón a las formas buscadas
    • Este método permite una buena preservación de huevos de helmintos. Sin embargo, presenta el inconveniente que permite el desarrollo de los huevos de nematodos y formación de estados infectantes
• Método de Burrows o del Fenol, Alcohol y Formalina (PAFS)
  • La muestra es recolectada de la misma forma que en el método MTM, pero utilizando el fijador PAF que permite diagnosticar quistes, trofozoitos, huevos y larvas de parásitos

Otras de las pruebas que se pueden llevar a cabo son las TINCIONES PERMANENTES como son la tinción Tricrómica y la tinción Hierro-Hematoxilina.

Por último se encuentran las TÉCNICAS ESPECIALES, que son las siguientes:

• Pruebas de Graham: se utiliza para el diagnóstico de Oxiuros generalmente aquellos que pertenecen al género Enterobius (Enterobius vermicularis) Se utiliza una cinta de celofán, que se sujeta con un depresor y se pasa por la zona perianal a primera hora de la mañana y sin aseo previo. Colocamos la cinta sobre un portaobjetos y examinamos en busca de huevos.
• Técnica para buscar quistes de Cryptosporidium: se trata de una tinción AAR modificada, que consiste en:
• Técnica para la búsqueda de proglótidas de cestodos (segmentos del cuerpo de gusanos): Se utiliza para diferenciar entre las especies de Taenia solium y Taenia saginata.
• Prueba de cápsulas duodenales o enterotest: Esta prueba se utiliza para la investigación de Giardia y Strongyloides. Consiste en hacer pasar un hilo de nylon con un peso por el intestino y posteriormente, cuando el hilo es eliminado, se raspa para la examinación.
• Tinción Tricrómica: Esta prueba es más concentrada que las tinciones tricrómicas que habitualmente se realizan. Se utiliza para la investigación de Microsporidium.
• Cuantificación de huevos: se utiliza para la investigación de Ascaris lumbricoides y Trichuris trichura. La prueba se lleva a cabo mediante el “Recuento de Stoll”:
  • Consiste en la realización de una suspensión con 4 gramos de heces.
  • Se utiliza un asa calibrada de 0,15 mL. Los resultados se expresan como:
  • % huevos / gramo = nº huevos x 100 x Factor de Corrección
  • El Factor de Corrección se pone en función de la contextura de las heces, así, para heces diarreicas se utiliza un 3, para heces blandas un 2 y para semiformes un 1,5.

DETECCIÓN DIRECTA EN OTRAS MUESTRAS DISTINTAS A HECES

Sangre: para el estudio del Paludismo, Filarias y Trypanosomas. Se pueden utilizar dos técnicas:

Capa fina: se realiza una extensión igual que para el frotis sanguíneo.

Gota gruesa: depositamos una gota en el centro de un portaobjetos y con el extremo de otro porta desfibrinamos la gota moviéndola como si la estuviéramos mezclando.

Esputo: se puede realizar un examen en fresco o tinciones permanentes. Podemos encontrar:

Fases larvarias de Áscaris, Strongyloides

Huevos de algunos gusanos

Amebas (excepcionalmente)

Criptosporidium

Exudados vaginales: se realiza un examen en fresco y se investiga la presencia de Trichomonas vaginalis.

Biopsias hepáticas, nódulos linfáticos y LCR

Pruebas serológicas y detección de Ag y técnicas de PCR

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