Medio con sedimento y a veces se observa películas o témpanos en la superficie de la parte líquida del medio.

Puede ser aislada de la sangre (Hemocultivo) en la fase hemática de la enfermedad, de las lesiones eruptivas (fase verrucosa o histioide) y del LCR en los casos de neurobartonelosis.

En el laboratorio se puede aislar la bacteria por Hemocultivo (fase hemática) usando el agar de fases, medio de aislamiento primario, por cultivo del verrucoma (fase eruptiva); se pueden realizar pruebas serológicas (aglutinaciones, fijación de complemento, Elisa, etc.), o por Infección de los hematíes humanos por Bartonella (Danza de los hematíes) e Inhibición del movimiento de los hematíes por acción de anticuerpos específicos antibartonella.

Material

• Frotis coloreados por Leishman, Wrigth o Giemsa procedentes de cultivo.
• Cultivo de la bacteria en Medio Agar Gel de Fases.
• Cortes histológicos de verrucoma coloreados con Hematoxilina eosina.

Procedimiento e Interpretación

• Observar al microscopio las láminas coloreadas y apreciar la morfología y tinción de Bartonella. En las láminas coloreadas observar las bacterias en forma de empalizada y en forma aislada. En los cultivos observar la turbidez del medio, la formación de sedimento y la formación de películas o témpanos.
• Realizar esquemas de las observaciones realizadas.

Práctica Nº 28

Estudio e Identificación de Treponema – Prueba de VDRL o RPR

Introducción

Las espiroquetas constituyen un grupo grande y heterogéneo de microorganismos espirilares móviles, dentro de las cuales se encuentra la familia Treponemataceae que comprende tres géneros de microorganismos patógenos para el hombre: Treponema (T. pallidum, causa la sífilis, T. pertenue, produce el pián, T. carateneum, produce el pinto), Borrelia (B. recurrentis produce la fiebre recurrente, B. burgdorferi causa la enfermedad de Lyme), y Leptospira que origina infecciones generales con fiebre, ictericia y meningitis.

La especie T. pallidum se caracteriza por ser de forma espiral delgados y miden 0.2 μm de ancho y 5 a 15 μm de largo, son móviles y giran constantemente, no se tiñen bien con los colorantes de anilina y es difícil su cultivo en medios artificiales.

Pruebas de Diagnóstico

1. Las muestras obtenidas de las lesiones superficiales tempranas (líquidos tisulares) pueden observarse en un microscopio de campo oscuro buscando las espiroquetas móviles características.
2. Por inmunofluorescencia usando suero antitreponema marcado con fluoresceína.
3. Pruebas serológicas para sífilis, estas pueden usar antígenos treponémicos o antígenos no treponémicos (cardiolipina purificada del corazón de buey).
4. Prueba de Floculación (VDRL), el antígeno VDRL es una solución alcohólica que contiene 0.03% de cardiolipina, 0.9% de colesterol y lecitina purificada; esta prueba está basada en que las partículas del antígeno lípido (cardiolipina) permanecen dispersas en suero normal y en enfermos se combina con la reagina de la sífilis (la reagina es una mezcla de IgM e IgA dirigidos contra algunos antígenos).

Materiales

• Suero problema.
• Antígeno VDRL.
• Láminas excavadas.
• Pipetas graduadas.

Procedimiento

Tomar con una pipeta 0.05 ml de suero calentado (baño María a 56°C x 30’) sobre la lámina excavada.

Añadir una gota del antígeno VDRL sobre el suero y rotar durante cuatro (4) minutos. Observar al microscopio con objetivo de menor aumento la formación de flóculos cuando la reacción es positiva.

Resultados

• N (No reactivo): Ausencia de flóculos.
• RD (Reactivo débil): Flóculos pequeños.
• R (Reactivo): Flóculos medianos y grandes.

Práctica Nº 29

Cultivo de Muestras de Infecciones Urinarias: Urocultivo

Introducción

El Urocultivo es el examen de muestras de orina que permiten el aislamiento de agentes patógenos causantes de una infección urinaria.

Para la obtención de muestras debe considerarse:

• La recolección debe ser con un mínimo de contaminación.
• Establecer el momento óptimo para la recolección, con el objeto de tener la mejor probabilidad de recuperar microorganismos causales.
• Obtener una cantidad suficiente de la muestra para efectuar las técnicas de cultivo necesarias. Toda vez que sea posible, obtener las muestras antes de la administración de antibióticos.

Normalmente la orina es estéril, pero al tomarse la muestra existe la posibilidad de contaminación por lo que se realiza de rutina el Urocultivo cuantitativo:

1. Si existe menos de 10,000 gérmenes por ml, se considera como contaminantes, siendo la muestra negativa.
2. Cuando la orina tiene más de 100,000 bacterias por ml, se considera que hay infección urinaria.
3. Si el número de gérmenes oscila entre 1,000 a 100,000 se interpreta como dudoso y será necesario repetir el cultivo.

La orina debe ser procesada en el laboratorio dentro de las 2 horas siguientes a la recolección para lograr recuentos de colonias exactos, luego se deberá identificarlas y realizar el Antibiograma correspondiente.

Material

• Muestra de orina patológica.
• Sedimento de orina.
• Agar Mac Conkey, Medio hipertónico de Chapman (Agar Manitol), Agar Sabouraud, en placas.
• Agar nutritivo en tubos con 20 ml licuado +/- 50°C.
• Agar Mac Conkey en tubos con 20 ml licuado +/- 50°C.
• Tubos con medio TSI, LIA, Caldo peptonado, MR-VP, Agar Citrato de Simmons, Agar Urea de Christensen.
• Tubos con 9.9 ml de Suero fisiológico 0.85%.
• Pipetas de 1 ml estériles.
• Placas Petri, vacías estériles.
• Bocal con desinfectante.
• Microscopio.
• Serie de colorantes de Ziehl-Neelsen.
• Serie de colorantes de Gram.
• Láminas portaobjetos y laminillas.

Etiquetas: Bartonella, diagnóstico microbiológico, Infecciones Urinarias, Treponema, urocultivo