Inactivación del Suero

Procedimiento

1. Agitar fuertemente los cultivos y filtrarlos a través de algodón.
2. Diluir los cultivos a 1/5000 de la siguiente manera:
   • A: 0,1 ml de cultivo + 9,9 ml de SSF (dilución 1/100)
   • B: 1,0 ml de la dilución A + 9,0 ml de SSF (dilución 1/1000)
   • C: 1,0 ml de la dilución B + 4 ml de SSF (dilución 1/5000)
3. Colocar en una gradilla tres tubos de hemólisis y agregar en ellos lo siguiente:
   • Tubo I: Suero sin inactivar: 0,5 ml; Cultivo (1/5000): 0,5 ml
   • Tubo II: Suero inactivado: 0,5 ml; Cultivo (1/5000): 0,5 ml
   • Tubo III: Solución Salina Fisiológica: 0,5 ml; Cultivo (1/5000): 0,5 ml
4. Agitar los tubos y colocarlos en Baño María durante 1 a 2 horas.
5. Previa identificación, verter el contenido de los tubos en incubación en las respectivas placas.
6. Añadir a las placas de Petri el agar fundido y enfriado a 40-45°C, rotándolas para obtener una mezcla homogénea. Dejar solidificar e incubar a 37°C por 24 horas.
7. Lectura.

Reacción de Widal

La reacción de Widal es un test basado en el principio de aglutinación antígeno-anticuerpo, donde se determina la presencia de anticuerpos contra el antígeno O y H de la Salmonella typhi y S. paratyphi en el serodiagnóstico de fiebre tifoidea.

Técnica Cualitativa

1. Colocar una gota de suero problema en cada uno de los espacios marcados en la lámina.
2. Agregar una gota de cada uno de los antígenos sobre las gotas del suero problema.
3. Mezclar uniformemente con un mondadientes (diferente para cada gota). Rotar la lámina por 3 minutos y, luego de un reposo de 3 minutos, observar los resultados.

Técnica Cuantitativa

1. Con una micropipeta, depositar 0,08, 0,04, 0,02, 0,01 y 0,005 ml del suero problema en la lámina.
2. Añadir una gota del antígeno que dio aglutinación en la prueba cualitativa a cada alícuota del suero.
3. Con un mondadientes, mezclar y rotar la lámina durante 3 minutos.

TSI

• Pico de flauta alcalino/profundidad alcalina (K/K): No fermentación de hidratos de carbono.
• Pico de flauta alcalino/profundidad ácida (K/A/gas): Glucosa fermentada; lactosa y sacarosa no fermentadas.
• Pico de flauta alcalino/profundidad ácido negra (K/A/H₂S): Glucosa fermentada, lactosa y sacarosa no fermentadas, producción de sulfuro de hidrógeno.
• Pico de flauta ácido/profundidad ácida (A/A): Glucosa, lactosa y sacarosa fermentadas.

Catalasa

1. Con el asa de siembra, recoger el centro de una colonia pura de 18-24 horas y colocar sobre un portaobjetos limpio.
2. Agregar con gotero o pipeta Pasteur una gota de H₂O₂ al 3% sobre el microorganismo sin mezclarlo con el cultivo.
3. Observar la formación inmediata de burbujas (resultado positivo).
4. Desechar el portaobjetos en un recipiente con desinfectante.
5. Si se invierte el orden del método (extender la colonia sobre el agua oxigenada) pueden producirse falsos positivos.

Coagulasa

1. En forma aséptica, se colocan 0,5 ml de plasma de conejo o humano.
2. Se agrega 0,5 ml de un caldo de cultivo puro de 18 a 24 horas (infusión cerebro corazón o tripticasa soya).
3. Se mezcla con suavidad rotando el tubo y se coloca en baño maría a 37°C.
4. Se observa la formación de coágulo (se debe observar el tubo cada 30 minutos).
   • Las bacterias fuertemente coagulasa positivas pueden producir un coágulo en 1-4 horas. Si a las 4 horas no se forma coágulo, la prueba debe observarse después de 18 a 24 horas de incubación.

Bacillus

Aerobiosis (+), Catalasa (+), Esporas (+), Movilidad variable.

Pruebas

Producción de lecitinasa, hemólisis en agar sangre, movilidad y sensibilidad a penicilina.

Pseudomonas aeruginosa

Gram (-), aeróbica, con motilidad unipolar, oxidasa (+). Secreta una variedad de pigmentos como piocianina (azul verdoso), fluoresceína (amarillo verdoso fluorescente) y piorubina (rojo pardo).

Medios de Cultivo

Agar Cetrimide, Agar Sangre. Siembra en medios King A y King B para la producción de pigmentos.

Respiratorio Superior

Laringitis, faringitis, epiglotitis, sinusitis, otitis externa y media, difteria, tos ferina, angina de Vincent y candidiasis oral. El examen directo no es recomendable.

Cultivo

Agar Sangre.

Vaginosis

Proliferación de anaerobios y Gardnerella vaginalis. Examen directo de flujo vaginal (examen directo al fresco), macroscópico y microscópico que cumpla con, al menos, tres de las siguientes características:

• Flujo adherente, blanco, grisáceo y homogéneo.
• pH mayor de 4.5.
• Test de amina positivo: Consiste en la adición de una gota de hidróxido de potasio al 10% sobre una muestra de secreción vaginal en un portaobjeto, con liberación de un olor característico a pescado.
• Presencia de Clue Cells (células clave): Las “Clue cells” son células epiteliales vaginales cubiertas por bacilos cortos, adheridos a ellas, visualizándose los bordes oscuros.

Heridas

• Lavar con suero fisiológico estéril cuidadosamente la superficie de la herida para retirar la flora colonizante.
• Recoger el pus mediante jeringa y aguja, aspirando preferentemente de zonas profundas.
• Cuando la muestra sea insuficiente, instilar suero o solución de Ringer lactato y aspirarlo nuevamente en la jeringa.

Herida Quirúrgica

La toma de muestra se realizará con técnica aséptica luego de la limpieza de la zona con suero fisiológico para eliminar la contaminación superficial. Se realizará por punción y se colocará la muestra en un recipiente estéril con tapa de rosca. Si se sospecha presencia de anaerobios, comunicarse con el laboratorio para solicitar medio de transporte. Si la muestra es obtenida con hisopo, realizar primero la limpieza de la zona y luego embeber en el pus el mismo.

Quemaduras

El tipo de toma de muestra es controvertido, pero los mejores resultados se han logrado con punch de tejido de 3 o 4 mm para realizar cultivos cuantitativos. Se transportan en tubos con tapa rosca estériles. Pueden hacerse tomas de exudado con hisopo haciendo las siguientes salvedades: solo se cultivarán para búsqueda de aerobios, no se hará cuantificación y, además, el resultado obtenido puede no ser representativo de la infección.

Toma de Muestra de Orina en Mujeres

1. Lavarse las manos cuidadosamente con agua y jabón, enjuagar con agua y secar con una toalla limpia.
2. Separar los labios mayores y menores, y mantenerlos separados en todo momento hasta que se haya recogido la orina.
3. Con una gasa enjabonada, lavar bien la vulva pasándola de delante hacia atrás. Repetir el proceso un total de 4 veces.
4. Enjuagar cuidadosamente con agua para eliminar los restos de jabón.
5. Indicar a la paciente que orine desechando el primer chorro (20-25 primeros mililitros). Tras lo cual, y sin interrumpir la micción, recoger el resto de la orina en el recipiente, el cual se cerrará inmediatamente.
6. El frasco debe sujetarse para que no tome contacto con la pierna, vulva o ropa de la paciente. Los dedos no deben tocar el borde del frasco o su superficie interior.

Toma de Muestra de Orina en Hombres

1. Lavado de las manos con agua y jabón.
2. Retraer completamente el prepucio, que se mantendrá así en todo momento, hasta que se haya recogido la orina.
3. Limpiar el glande con jabón neutro.
4. Eliminar los restos de jabón enjuagándolo con agua.
5. Pedir al paciente que orine desechando el primer chorro (los primeros 20-25 mililitros) y, sin interrumpir la micción, recoger el resto de la orina en el recipiente estéril.

Toma de Muestra de Orina por Sonda

1. Si es posible, realizar la toma inmediatamente luego del recambio de la sonda.
2. Pinzar la sonda a 10 cm del meato durante 1 a 2 horas como máximo.
3. Sin despinzar, desinfectar la sonda con Yodopovidona al 10%, a 3-4 cm por encima de la pinza.
4. Extraer orina puncionando la sonda con jeringa y aguja.
5. Colocar la orina en un frasco estéril.

Hisopos Rectales

1. Para realizar la toma, introducir el hisopo sobrepasando el esfínter anal y rotarlo para tomar muestra de las criptas anales. Mantener allí durante 30 segundos para que se absorban los microorganismos y retirar.
2. Una vez realizado, introducir en un medio de transporte.

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